Meio Interno e Protéinas Plasmáticas
Dizemos que o Meio Interno é uma forma fisiológica de nos referirmos ao compartimento extracelular do corpo. Trata-se da linfa, sangue e liquor, ou seja, é o conjunto de líquidos extracelulares, tais como sangue, linfa, líquido instersticial, liquor, entre outros. Através desses líquidos ocorrem trocas metabólicas, havendo comunicação entre diferentes e distantes locais no organismo. "Como podemos avaliar o estado de uma animal?"A resposta é simples. Podemos avaliar esse animal, através da avaliação do sangue. A partir de uma amostra conseguimos saber como se encontra o conjunto daquele animal.
SANGUE
É o principal líquido e, de maior volume, do meio interno. Em laboratórios separamos a parte líquida da celular do sangue. Podemos dizer que os produtos derivados do sangue são: SORO E PLASMA.
Para que possamos obter do soro ou do plasma sanguíneo há dois procedimentos:
Com anticoagulante: É feita a coleta do sangue com anticoagulante, como é o caso do EDTA, ou o citrato, seguidos pela centrifugação à 3000rpm por 5 minutos, fazendo com que o for mais denso vá para baixo. Há a separação do material em três fases, onde o mais pesado fica no fundo, compreendendo as hemácias, caracterizada como segmento vermelho; na fase intermediária há uma formação de células brancas, chamadas de leucócitos; acima e chamado de "sobrenadante", temos o plasma, o qual caracteriza-se por ser um líquido venoso, um pouco mais amarelado.
Sem anticoagulante: Para obtenção do soro, é feita a coleta do soro soro sem anticoangulante, e deixamos em banho maria, por mais ou menos 30 minutos, dependendo da temperatura, podemos deixá-lo em torno de 3 horas. O sangue começa a se manifestar e se concentrar, tornando um pouco mais escuro, aí teremos a formação do que chamamos de coágulo. Na porção intermediária, obtemos um tipo de aglomerado do coágulo, e a ele damos o nome de gel separador. Por último, obtemos a formação de um líquido acelular do sangue, chamada de sódio. O soro irá conter todas as substâncias orgânicas, íons e proteínas, com exceção das proteínas da coagulação sanguínea.
SORO
Fração líquida do sangue, acelular e contendo parte das proteínas presentes no sangue. Para detê-lo não é necessário o uso de anticoagulante.
PLASMA
Fração líquida do sangue, acelular e contendo TODO conteúdo de proteínas presentes originalmente no sangue. Para detê-lo é necessário o uso de anticoagulante.
FUNÇÕES DO SANGUE
1. Transporte de:
- O2 e CO2: as trocas gasosas ocorrem através do sangue;
- Hormônios: através do sangue podem se comunicar com os diferentes tecidos, à diferentes distâncias;
- Nutrientes: o sangue nutre os diferentes tecidos com tudo o que digerimos e absorvemos;
- Restos metabólitos: o sangue por meio das excretas, pode transportar os restos metabólitos e também os metabólitos normais.
2. Homeostasia:
- Balanço hídrico: equilíbrio hidroeletrolítico;
- Balanço ácido-base: existem tampões presentes no sangue;
- Temperatura corporal: o calor circula através do sangue.
3. Defesa
O sangue possui diferentes armas para a defesa do organismo. A defesa celular é dada pelo sistema auto-imune, realizado pelo que chamamos de anticorpos.
4. Auto-defesa:
Também há mecanismos que o preservam, tais como: coagulação sanguíena; fubrinólise. Para que não haja perda subta de sangue no organismo, existem esses mecanismos que mantém o volume sanguíneo corporal.
ERITRÓCITO
O eritrócito é a célula mais abundante do sangue, compreendendo mais ou menos 50% do seu volume, São os que chamamos de células vermelhas.
LEUCÓCITO
PLAQUETAS
ELETRÓCITOS E METABÓLITOS DO SANGUE
Os metabólitos que encontramos no sangue são: Glicose; lactato; piruvato;uréia; ácido úrico; creatina; aminoácidos; amônia; lipídeos; trialcilgliceroís e colesterol. Já os eletrócitos encontrados no sangue são: ânions (bicarbonato HCO3menos); Cloreto; proteínas, fosfato inorgânico. Também tem os cátions: Sódio; potássio; Ca2+ livre e Mg 2+ livre.
FRACIONAMENTO SALTING IN E SALTING OUT
Há muitas proteínas no sangue, encontradas no soro e no plasma Elas são chamadas de proteínas plasmática. Estas proteínas compreendem mais ou menos 8-10g/ctl de sangue, e tem grande importância principalmente no transporte de substâncias. Uma das técnicas de separação de proteínas é a salinização progressiva, o qual é um método capaz de quantificar e classificar as diferentes proteínas. As proteínas são sensíveis a diferenças no pH do meio e a sais também.
No processo de salinização progressiva é adicionada progressivamente uma solução salina (Sulfato de amônia, por exemplo).
Salting IN: dentro da solução
Salting OUT: fora da solução (forma precipitada)
Quanto menor a concentração de sal, temos íons muitos solúveis;
Quanto menor a concentração de sal, os íons precipitam.
Analisando a figura acima, podemos ver que 0,4M (Salting IN), as proteínas se encontram dissolvidas. Enquanto a 0,1M (Salting OUT), as proteínas vão precipitando.
As primeiras proteínas que precipitam são as globulinas, consideradas um grupo de lipoproteínas que são principalmente transportadoras. As globulinas, possuem menos cargas disponíveis, então são mais instáveis, precipitando mais rapidamente.
No caso das albuminas, elas possuem mais cargas disponíveis, então, será mais estável e solúvel, permanecendo na solução, precipitando somente após um tempo maior. Elas tem maior influência no pH do sangue, podendo funcionar como um tampão (neutralizadoras). Através da salinização progressiva conseguimos separar as globulinas de albuminas.
FRACIONAMENTO POR ELETROFORESE
Essa é outra técnica para realizar a separação das proteínas.
Para que esta técnica seja realizada, temos que ter a seguinte condição: Ter um campo elétrico conhecido, embebido em uma solução tampão que mantenha o pH em torno de 9,0. As proteínas possuem ponto isoelétrico a um pH menos que 7,5. Nessa condição o número de cargas negativas é o mesmo que o de positivas. A intenção da eletroforese é que as proteínas corram pelo campo elétrico de um polo negativo para o polo positivo. Se a proteínas estiver em seu ponto isoelétrico, ela ficará parada no gel, e não correrá. Por isso usa-se essa solução tanpao de pH 9,0. Desta forma, as proteínas ficam carregadas negativamente (carga líquida negativa) e correm para o polo positivo. Estas proteínas correm pelo campo de eletroforese em velocidades diferentes ( tem diferentes velocidades de difusão) e é assim que são diferenciadas e classificadas.
A eletroforese separa mais ou menos 5 diferentes proteínas:
Aquelas mais rápidas, dentre elas encontramos as albuminas (transportadoras de substâncias pouco solúveis), elas são um pouco mais rápidas do que as globulinas (alfa 1, alfa 2 e beta são as transportadoras) enquanto gama são as globuinas compostas por imuno-proteínas/anticorpos).
A identificação é feita por Colorimetria ou por Densitometria. Onde a coloração mostra o ponto no gel em que se encontram as proteínas, por faixa de cor. Enquanto a densitometria, colore o gel,e quanto mais veloz, mais alto será o pico do gráfico gerado. Ale´m de separar as proteínas, pode-se quantificar as diferentes frações de proteínas.
FUNÇÕES DAS PROTEÍNAS NO PLASMA
" A persistência é o caminho do êxito." - Charles Chaplin.
Comentários
Postar um comentário